体外免疫技术服务

外周血稀有免疫细胞（Rare Peripheral Immune Cells）尽管在外周血中含量极低（通常低于1%），但在维持机体免疫稳态、抵御特定病原体感染、介导肿瘤免疫监视及调控自身免疫反应等过程中发挥着不可或缺的关键作用。此类稀有免疫细胞通常具备高度特异的功能表型，例如调节性T细胞（Tregs）的免疫抑制功能、自然杀伤T细胞（NKT细胞）的快速细胞因子分泌能力等，其功能特异性与机体免疫调控的精准性密切相关。

外周稀有免疫细胞在多种特定疾病（如自身免疫性疾病、肿瘤、慢性感染性疾病）的发生发展中扮演着核心角色，例如，部分稀有免疫细胞的功能缺陷可直接诱发疾病的发生或加速疾病进展。在免疫治疗（如CAR-T细胞疗法、免疫检查点抑制剂治疗）的研发过程中，精确解析此类稀有细胞的受体表达谱及信号传导通路，是优化治疗策略、提升治疗疗效的重要前提；同时，稀有免疫细胞的数量异常或功能状态改变，常可作为评估疾病预后及治疗反应的潜在生物标志物，为疾病的精准诊断和治疗监测提供重要参考。

针对上述外周稀有免疫细胞的相关研究需求，体外原代分离的外周稀有免疫细胞展现出不可替代的应用优势。体外原代分离的外周稀有免疫细胞能够最大程度保留其在体内的原始表型及功能特性，更贴近生理状态；与长期传代培养的细胞系相比，原代细胞更能真实复刻人体免疫系统的复杂性及细胞间的相互作用，为相关研究提供更可靠的实验模型。必赢国际bwi437依托多年积累的原代细胞分离核心工艺，可实现多种外周稀有免疫细胞的高效、高纯度分离，为各类免疫相关研究提供稳定、优质的细胞样本支撑。

解离的原代肿瘤细胞（Dissociated Tumor Cells, DTCs）在药物开发过程中，尤其是先导药物从临床前研究向临床研究的转化中，具有关键意义：

（1）DTCs可完整保留肿瘤微环境的异质性，包含肿瘤细胞、免疫细胞及间质细胞等多种组分，能够更真实地模拟人体内肿瘤的生物学特性。相较于传统细胞系，DTCs可有效降低因模型简化带来的假阳性、假阴性结果，显著提升体外药效评估结果的可靠性，进而降低药物临床转化的失败风险。

（2）作为即用型活细胞悬液，DTCs可快速构建高通量筛选平台，研究者无需花费大量时间进行组织解离操作，即可同步检测不同肿瘤亚型对先导药物的响应特性，大幅缩短靶点验证与药物优化的周期，提升药物开发效率。

（3）此外，通过匹配患者来源DTCs的基因组数据和药敏结果建立的预测性生物标志物体系，为临床试验设计提供分层治疗依据，例如筛选出可能从药物治疗中获益的特定人群，或提前规避潜在的药物耐药机制，助力精准医疗策略的制定。

（4）DTCs库涵盖的肿瘤亚型多样性还有助于早期评估药物广谱性，在IND申报阶段，利用多供体DTCs获得的药效/毒性数据可更科学地确定首期临床试验的给药剂量及适应症范围。据相关研究报道，基于DTCs平台验证的PD-1抑制剂，其临床前药效数据与I期临床试验结果的一致性达75%，远高于传统细胞系模型（约40%），这种转化效率的提升直接降低了药物开发成本，平均减少15-20%的临床前重复实验。

（5）DTCs通过提供高度仿生的研究模型，已成为连接基础研究与临床试验的重要桥梁，其应用正在重塑从靶点发现、药物筛选到临床验证的全流程药物开发路径。

必赢国际bwi437依托多年的技术积淀，结合丰富的临床资源支撑，针对性地开发了多种类型癌症的DTCs分离制备工艺，涵盖新鲜及冻存两种细胞形式，涉及结直肠癌、胃癌、甲状腺癌等多种癌症类型，可充分满足客户不同的应用场景需求，为药物开发相关研究提供稳定、优质的技术支撑。

服务特点：

• 高细胞活率

新鲜制备的DTCs细胞活率≥75%，冻存复苏后存活率仍保持50%以上，能有效保障细胞功能完整性，可充分满足体外药效评估、细胞功能检测等多种实验需求。

• 完整保留肿瘤微环境

保留肿瘤组织中的各类组分，包括肿瘤细胞、免疫细胞（T细胞、B细胞、NK细胞、髓样细胞）及支持细胞（成纤维细胞、内皮细胞），能真实模拟体内肿瘤的生理状态；同时，通过流式细胞术对CD45⁺免疫细胞及特定肿瘤标志物（如EpCAM、CD133、CD44）的表达进行验证，为每一份肿瘤样本提供标准化的细胞类群分布特征标签，提升样本的可追溯性与研究可靠性。

• 免疫细胞亚群保留

可有效维持T细胞（CD4⁺、CD8⁺亚群）、B细胞、NK细胞及髓系细胞（CD11b⁺、CD14⁺亚群）的比例，保留肿瘤免疫微环境的细胞间相互作用关系，满足肿瘤免疫机制研究、免疫治疗相关筛选等需求。

• 广泛适用性

支持流式细胞术检测、3D类器官培养、药物活性筛选、适应症范围筛查、PDX模型构建及高通量测序等多种下游实验应用，可适配药物开发全流程的不同研究场景。

• 成本与效率优势

避免新鲜组织获取的复杂流程和高成本，缩短实验准备时间；标准化解离与冻存流程，确保批次间一致性。

• 获取方式灵活

可根据客户的具体研究需求，提供定制化的DTCs样本分离制备服务，精准匹配不同研究场景的个性化需求。

制备流程

部分数据展示

图1、结直肠癌DTCs复苏后用DMEM+10%FBS培养基培养若干天后的明场图

图2：不同肿瘤来源的DTCs冻存前后细胞活率对比

图3：不同冻存的DTCs样本复苏后细胞回收率分析

图4：不同患者来源的DTCs样本中肿瘤细胞与免疫细胞的相对比例存在明显差异

图5：不同患者来源的DTCs样本中免疫细胞亚型的比例分布图

体外扩增免疫细胞在生物医学研究和临床治疗中具有重要意义。必赢国际bwi437深耕免疫细胞相关服务，除可提供多种原代免疫细胞分离服务外，还提供 pan T、B、NK、γδ T、iNKT、CIK、TIL 等多种类型免疫细胞的体外高效诱导与扩增服务，精准匹配客户体内外多场景研究需求。

部分数据展示

图1：不同供体来源PBMC的γδT细胞扩增

图2：不同供体来源PBMC的NK细胞扩增

图3、4：不同来源T细胞体外扩增曲线及明场图

免疫细胞疗法是生物制药领域增速领先的核心细分赛道，主要涵盖CAR-T、CAR-NK、TCR-T、TIL 等。供体筛选作为细胞疗法（尤其是异体细胞疗法）的核心关键环节，直接决定着治疗的安全性、细胞扩增的能力上限以及细胞疗法潜能。

必赢国际bwi437凭借多年行业深耕积累的技术经验，已搭建起合规、优质、规模庞大的标准化供体资源库，可针对 CAR‑T、CAR‑NK、TCR‑T等各类免疫细胞疗法，为客户提供定制化供体筛选服务。通过严格的供体甄选、合规管理与功能验证，从源头把控细胞产品安全性、合规性，最大化释放细胞扩增潜力与治疗效能，为异体细胞疗法的研发与产业化提供稳定可靠的核心支撑。

必赢国际bwi437提供基于不同样本形式的多元化供体筛选模式，客户可根据自身研发周期、成本预算、样本需求及项目推进节奏灵活选择，精准匹配不同研发场景下的供体筛选需求。

在生物医药研发中，基于不同供体外周血单个核细胞（PBMC）的细胞因子释放预筛选是保障治疗安全性与有效性的关键质量控制手段。该预筛工作通过评估不同供体的免疫反应异质性，可及时识别出潜在的高危供体（如细胞因子风暴易感个体），从而有效规避由于供体生物学差异引发的临床不良反应或疗效波动。建立标准化的供体筛选体系，不仅能够提升药物研发的可重复性和批间一致性，还能降低临床试验风险与研发成本，助力药物从临床前研发到产业化上市的高效推进进程。

必赢国际bwi437依托自身庞大供体库优势，可根据客户多样化需求，采用 CBA、ELISA、MSD、Luminex、ELISPOT 等多种因子释放检测方法，提供不同目标因子及因子组合的定制化检测服务，全方位匹配客户研发需求。

部分数据显示：

图1、不同供体PBMC在同一激活条件下，呈现出非常不同的因子释放水平。

常规免疫细胞（T 细胞、NK 细胞、B 细胞等）的活化、增殖及细胞因子释放，是机体固有免疫与适应性免疫应答的核心环节，也是体外免疫功能评价的基础检测内容。主要通过检测 T、NK、B 等关键免疫细胞的活化表型、增殖水平及 IL‑2、IFN‑γ、TNF‑α 等功能性细胞因子的分泌特征，系统评估药物、疫苗或细胞制剂对核心免疫细胞的调控效应，是判断免疫激活 / 抑制能力、评价候选分子药效与安全性、阐明作用机制的关键依据。

部分数据展示：

图1：T细胞激活后的活化maker检测

图2：T细胞激活后的因子释放

图3：T细胞增殖活性检测

CTL（细胞毒性 T 淋巴细胞）、NK（自然杀伤细胞）、γδT 细胞是机体介导靶细胞杀伤的核心效应细胞，分别在适应性免疫、固有免疫及跨界免疫应答中发挥关键作用。通过体外共培养模型，评估其对靶细胞（如肿瘤细胞、病原体感染细胞等）的特异性或非特异性杀伤活性，核心检测指标包括杀伤率、杀伤动力学等。该类实验是评价免疫调节剂、细胞治疗制剂（如 CAR-T、NK 细胞制剂）及疫苗杀伤效能的核心手段，为阐明免疫杀伤机制、筛选高效候选产品、评估临床应用潜力提供关键实验依据。

部分数据展示：

图1：体外扩增的NK、γδT细胞经冻存后复苏，与靶细胞共孵育，检测杀伤效率

树突状细胞（DC）是体内功能最强的专职抗原呈递细胞，是连接固有免疫与适应性免疫的核心枢纽，其活化成熟与细胞因子分泌是启动特异性免疫应答的关键起始环节。通过检测 DC 表面共刺激分子（CD80、CD86、MHC Ⅱ 等）的表达上调水平，以及 IL-12、IL-6、TNF-α 等关键细胞因子的释放特征，系统评估候选药物、疫苗、抗原及生物制剂对 DC 的活化诱导能力。该部分实验是判断免疫原性强弱、评价疫苗免疫效果、解析免疫调节机制及预测临床免疫应答的重要依据。

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图1：诱导的DC细胞经刺激后，检测细胞激活marker的表达与细胞因子的释放水平

调节性 T 细胞（Treg）是介导机体免疫负调控、维持免疫耐受与免疫稳态的核心细胞亚群，可通过细胞间直接接触或分泌 IL-10、TGF-β 等抑制性细胞因子，负向调控效应 T 细胞、DC 等免疫细胞的过度活化。

Treg 抑制实验是体外评价 Treg 免疫抑制功能的核心检测手段，通过将Treg 与效应 T 细胞共培养，定量检测效应 T 细胞的增殖、活化水平及细胞因子分泌变化，从而评估 Treg 对免疫应答的抑制强度与调控效能。该实验是自身免疫疾病、肿瘤免疫、移植排斥及免疫调节类药物研发中，评价免疫抑制效果、解析免疫耐受机制的关键功能实验。

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图1：诱导的iTreg细胞与刺激条件下的effector T（Teff）共培养，检测iTreg对Teff的增殖抑制活性

单核细胞活性氧（ROS）生成实验与细胞吞噬实验是评价单核细胞固有免疫功能的核心检测手段。ROS 生成实验通过检测单核细胞受刺激后活性氧的产生水平，反映其氧化杀伤与免疫激活状态；细胞吞噬实验则定量评估单核细胞对病原体、异物颗粒等靶标的摄取能力，表征其吞噬清除及抗原呈递相关功能。二者联用可系统评价药物、疫苗及生物制剂对单核细胞免疫功能的调控效应，为固有免疫机制研究、候选产品的药效与安全性评估提供关键依据。

部分数据展示：

图1：阳选CD14+单核细胞经刺激培养后检测ROS生成情况

中性粒细胞活性氧（ROS）生成实验、IL‑1β 释放实验及 NETosis 实验，是评价中性粒细胞固有免疫功能与炎症应答的核心检测指标。其中，ROS 生成实验反映中性粒细胞活化后的氧化杀菌能力，IL‑1β 释放实验表征其促炎细胞因子分泌水平，NETosis 实验则检测中性粒细胞胞外诱捕网的形成能力；三者联合可系统评估药物、疫苗及生物制剂对中性粒细胞免疫活化与炎症反应的调控效应，为抗感染、抗炎及生物制剂的药效与安全性评价提供关键实验依据。

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图1：中性粒细胞激活后检测ROS生成

图2：中性粒细胞激活后检测IL-1β释放情况

采用多色流式细胞术，对外周血中 T 细胞、B 细胞、NK 细胞、单核细胞等核心免疫细胞亚群进行精准分型与定量检测，系统分析细胞比例、表型特征及活化、功能相关标志物表达水平，为机体免疫状态评估、疾病免疫机制研究、药物疗效评价及临床预后监测提供客观、可靠的细胞学数据支撑。

部分数据展示：

图1. 不同供者PBMCs中PD-1表达流式分析

表1. 部分疾病样本PBMC流式分型特征

肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor infiltrating lymphocytes, TILs）的分离与分析是肿瘤免疫微环境研究及 TIL 细胞疗法开发的核心技术环节。通过标准化酶解、机械解离、密度梯度离心等组合工艺，从实体瘤组织中高效分离纯化肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）；结合流式细胞术、细胞功能检测等技术，对 TILs 的亚群组成、表型特征、杀伤活性、细胞因子分泌水平及体外扩增潜能进行系统性表征，为肿瘤免疫机制研究、TIL 细胞疗法的工艺优化、供体筛选及临床疗效评价提供关键数据支撑。

部分数据展示：

图1：肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor infiltrating lymphocytes, TILs）分离与分析

血清/血浆因子/蛋白水平分析以血清、血浆为检测样本，对细胞因子、炎症因子、免疫调节因子及关键功能蛋白进行精准定量检测，可系统反映机体免疫应答、炎症状态及病理生理变化，为疾病机制研究、生物标志物筛选、药物疗效评估及机体免疫状态评价提供可靠的分子水平数据支撑。